Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (Pengubahsuaian antibodi) ialah polimerase DNA termostabil permulaan panas daripada Thermus aquaticus YT-1，yang mempunyai aktiviti polimerase 5′→3′ dan aktiviti endonuklease flap 5′.Polimerase DNA Taq permulaan panas ialah polimerase DNA Taq yang diubah suai oleh antibodi Taq termolabile.Pengubahsuaian antibodi meningkatkan kekhususan, sensitiviti, dan hasil PCR.
Komponen
| Komponen | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| Penampan 5×HC Taq | 4×1 mL | 4×10 mL | 4×50 mL | 5×400 mL |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (Antibodi diubah suai) (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 10×5 mL |
Aplikasi
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 pada 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 dan 50% Gliserol.
Keadaan Penyimpanan
Pengangkutan di bawah 0°C dan disimpan pada -25°C~-15°C.
Definisi Unit
Satu unit ditakrifkan sebagai jumlah enzim yang menggabungkan 15 nmol dNTP ke dalam bahan tidak larut asid dalam 30 minit pada 75°C.
Kawalan kualiti
1.EndAktiviti onuclease:Pengeraman 20 U enzim dengan 4 μg pUC19 DNA selama 4 jam pada 37 ℃ menyebabkan tiada degradasi DNA yang dapat dikesan seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel.
2.5 kb Lambda PCR:25 Kitaran penguatan PCR 5 ng Lambda DNA dengan 1.25 unit Taq DNA Polymerase dengan kehadiran 200 µM dNTP dan 0.2 µM primer menghasilkan produk 5 kb yang dijangkakan.
3.Aktiviti Exonuclease:Pengeraman 50 µl tindak balas yang mengandungi sekurang-kurangnya 12.5 U Taq DNA Polimerase dengan 10 nmol 5´-FAM oligonukleotida selama 30 minit pada 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan.
4.Aktiviti RNase:Pengeraman 10 µL tindak balas yang mengandungi 20 U enzim dengan 1μg transkrip RNA selama 2 jam pada 37°C menyebabkan tiada degradasi RNA yang dapat dikesan seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel.
5.Penyahaktifan Haba:Tidak.
Sistem Tindak Balas
| Komponen | Kelantangan |
| DNA templata | pilihan |
| Primer Hadapan 10 μM | 0.5 μL |
| Primer Songsang 10 μM | 0.5 μL |
| Campuran dNTP (10mM setiap satu) | 0.5 μL |
| Penampan 5×HC Taq | 5 μL |
| Taq DNA Polimeraseb(5U/μL) | 0.125 μL |
| Air tanpa nukleus | Sehingga 25 μL |
Nota:
1) a.
| DNA | Jumlah |
| Genomik | 1 ng-1 μg |
| Plasmid atau Viral | 1 ms-1 ng |
2) b.Kepekatan optimum Taq DNA Polymerase mungkin berkisar antara 5-50 unit/mL (0.1-0.5 unit/25 µL tindak balas) dalam aplikasi khusus.
Protokol berbasikal terma
PCR
| Langkah | Suhu(°C) | Masa | Kitaran |
| Denaturasi awala | 95 ℃ | 1-3minit | - |
| Denaturasi | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Kitaran |
| Penyepuhlindapanb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Sambungan | 68 ℃ | 1kb/min | |
| Sambungan Akhir | 68 ℃ | 5minit | - |
Nota:
1) Denaturasi awal selama 1 minit pada 95°C adalah mencukupi untuk kebanyakan amplifikasi.Untuk templat yang sukar, denaturasi lebih lama 2-3minit pada 95°C disyorkan.Dengan PCR koloni, denaturasi 5 minit awal pada 95°C disyorkan.
2) Langkah penyepuhlindapan biasanya 15-60 s.Suhu penyepuhlindapan adalah berdasarkan Tm pasangan primer dan biasanya 45-68℃.
