Kit Genotaip Tetikus

No Kucing: HCR2021A

Produk ini ialah kit yang direka untuk pengecaman pantas genotip tetikus, termasuk pengekstrakan mentah DNA dan sistem penguatan PCR.Produk ini boleh digunakan untuk penguatan PCR terus dari ekor tetikus, telinga, jari kaki dan tisu lain selepas pembelahan mudah oleh Lysis Buffer dan Proteinase k.Tiada penghadaman semalaman, pengekstrakan fenol-kloroform atau penulenan lajur, yang mudah dan memendekkan eksperimen yang memakan masa.Produk ini sesuai untuk penguatan serpihan sasaran sehingga 2kb dan tindak balas PCR multipleks dengan sehingga 3 pasang primer.Campuran PCR Langsung Tisu 2×Tetikus mengandungi polimerase DNA kejuruteraan genetik, Mg²⁺, dNTP dan sistem penimbal yang dioptimumkan untuk menyediakan kecekapan amplifikasi yang tinggi dan toleransi perencat, supaya tindak balas PCR boleh dijalankan dengan menambah templat dan primer serta menghidratkan semula produk kepada 1×.Produk PCR yang dikuatkan dengan produk ini mempunyai tapak "A" yang menonjol pada hujung 3′ dan boleh digunakan terus untuk pengklonan TA selepas penulenan.

Komponen

Keadaan Penyimpanan

Produk hendaklah disimpan pada -25~-15℃ selama 2 tahun.Selepas pencairan, Lysis Buffer boleh disimpan pada 2~8 ℃ untuk kegunaan berbilang jangka pendek, dan gaul rata apabila digunakan.

Permohonan

Produk ini sesuai untuk analisis kalah mati tetikus, pengesanan transgenik, genotaip dan sebagainya.

ciri-ciri

1.Operasi mudah: tidak perlu mengekstrak DNA genomik;

2.Aplikasi luas: sesuai untuk penguatan langsung pelbagai tisu tetikus.

Arahan

1.Pembebasan DNA genomik

1) Penyediaan lysate

Tisu lisat disediakan mengikut bilangan sampel tetikus yang hendak dilisiskan (tisu lisat hendaklah disediakan di tapak mengikut dos dan dicampur dengan teliti untuk digunakan), dan perkadaran reagen yang diperlukan untuk satu sampel adalah seperti berikut:

2) Penyediaan Sampel dan Lisis

Penggunaan Tisu yang Disyorkan

Ambil jumlah sampel tisu tetikus yang sesuai dalam tiub emparan bersih, tambahkan 200μL lisat tisu segar pada setiap tiub emparan, vorteks dan goncang, kemudian inkubasi pada 55 ℃ selama 30 minit, dan kemudian panaskan pada 98 ℃ selama 3 minit.

3) Emparan

Goncang lysate dengan baik dan sentrifuge pada 12,000 rpm selama 5 minit.Supernatan boleh digunakan sebagai templat untuk penguatan PCR.Jika templat diperlukan untuk penyimpanan, pindahkan supernatan ke tiub centrifuge steril yang lain dan simpan pada -20 ℃ selama 2 minggu.

2.Penguatan PCR

Keluarkan 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix dari -20℃ dan cairkan pada ais, gaul terbalik dan sediakan sistem tindak balas PCR mengikut jadual berikut (beroperasi di atas ais):

Catatan:

a) Jumlah yang ditambah tidak boleh melebihi 1/10 daripada sistem, dan jika terlalu banyak ditambah, penguatan PCR mungkin dihalang.

Syarat PCR yang Disyorkan

Catatan:

a) Suhu penyepuhlindapan: Dengan merujuk kepada nilai Tm primer, adalah disyorkan untuk menetapkan suhu penyepuhlindapan kepada nilai Tm primer yang lebih kecil +3~5℃.

Masalah dan Penyelesaian Biasa

1.Tiada jalur yang disasarkan

1) Produk lisis yang berlebihan.Pilih jumlah templat yang paling sesuai, biasanya tidak melebihi 1/10 daripada sistem;

2) Saiz sampel yang terlalu besar.Cairkan lysate 10 kali dan kemudian kuatkan, atau kurangkan saiz sampel dan lisis semula;

3) Sampel tisu tidak segar.Adalah disyorkan untuk menggunakan sampel tisu segar;

4) Kualiti primer yang tidak baik.Gunakan DNA genomik untuk amplifikasi untuk mengesahkan kualiti primer dan mengoptimumkan reka bentuk primer.

2.Penguatan bukan spesifik

1) Suhu penyepuhlindapan terlalu rendah dan nombor kitaran terlalu tinggi.Meningkatkan suhu penyepuhlindapan dan mengurangkan bilangan kitaran;

2) Kepekatan templat terlalu tinggi.Kurangkan jumlah templat atau cairkan templat 10 kali selepas penguatan;

3) Kekhususan primer yang lemah.Optimumkan reka bentuk primer.

Nota

1.Untuk mengelakkan pencemaran silang antara sampel, pelbagai alat pensampelan harus disediakan, dan permukaan alat boleh dibersihkan dengan larutan natrium hipoklorit 2% atau pembersih asid nukleik selepas setiap pensampelan jika penggunaan berulang diperlukan.

2.Adalah disyorkan untuk menggunakan tisu tetikus segar, dan volum pensampelan tidak boleh terlalu besar untuk mengelak daripada menjejaskan keputusan amplifikasi.

3.Penampan Lysis harus mengelakkan pencairan beku yang kerap, dan boleh disimpan pada 2~8 ℃ untuk kegunaan berbilang jangka pendek.Jika disimpan pada suhu rendah, pemendakan mungkin berlaku, dan mesti dibubarkan sepenuhnya sebelum digunakan.

4.Campuran PCR harus mengelakkan pencairan beku yang kerap, dan boleh disimpan pada suhu 4 ℃ untuk kegunaan berulang jangka pendek.

5.Produk ini hanya untuk penyelidikan eksperimen saintifik dan tidak boleh digunakan dalam diagnosis atau rawatan klinikal.