UNG Sensitif Suhu
UNG Sensitif Suhu (TS-UNG) ialah satu yang diperolehi melalui ungkapan rekombinan dalam E. coli.Enzim ini memangkinkan pembebasan urasil bebas daripada DNA untai tunggal dan dua untai yang mengandungi urasil dan tidak aktif terhadap RNA.Berbanding dengan enzim UNG konvensional asal gen E. coli, enzim TS-UNG mempunyai aktiviti yang lebih tinggi pada suhu rendah (20℃~37℃) dan sensitif suhu dan mudah dinyahaktifkan (50℃), mengelakkan degradasi penguatan yang mengandungi dUTP. produk pada suhu bilik oleh aktiviti sisa yang mungkin kekal selepas penyahaktifan enzim UNG konvensional.Oleh itu, enzim TS-UNG bukan sahaja sesuai untuk tindak balas pencegahan pencemaran PCR, tetapi juga dipadankan dengan baik dengan program penguatan RT-PCR dan boleh digunakan dalam tindak balas pencegahan pencemaran RT-PCR.
Permohonan yang Disyorkan
Penguatan Pencegahan Pencemaran
Keadaan Penyimpanan
-20°C untuk penyimpanan jangka panjang, hendaklah dicampur dengan baik sebelum digunakan, elakkan kerap beku-cair.
Penimbal storan
20 mM Tris-HCl (pH 7.5) , 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Penstabil, 50% Gliserol.
Definisi Unit
Jumlah enzim yang diperlukan untuk merendahkan 1µg DNA untai tunggal yang mengandungi bes dU dalam 1 jam pada 37°C ialah 1 unit aktiviti (U).
Kawalan kualiti
1.Ketulenan elektroforesis SDS-PAGE lebih daripada 98%
2.Aktiviti degradasi, kawalan kelompok ke kelompok, kestabilan
3.Tiada aktiviti nuklease eksogen, tiada pencemaran endonuklease eksogen atau exonuklease.
Arahan
| Komponen | Isipadu (μL) | Kepekatan akhir |
| 10 × PCR Buffer (bebas dNTP, Mg²+percuma) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (ganti dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Campuran Primera | 2 | 1× |
| templat | - | ＜1μg/tindak balas |
| ddH₂O | Ke 50 | - |
Nota: a: Jika digunakan untuk qPCR/qRT-PCR, probe pendarfluor perlu ditambah ke dalam sistem tindak balas.Biasanya, kepekatan primer akhir 0.2 μM boleh memberikan hasil yang baik;apabila prestasi tindak balas adalah lemah, kepekatan primer boleh dilaraskan dalam julat 0.2-1 μM.Biasanya, kepekatan probe dioptimumkan dalam julat 0.1-0.3 μM.Eksperimen kecerunan kepekatan boleh dilakukan untuk mencari gabungan primer dan probe yang terbaik.
Nota
1.Suhu tindak balas optimum enzim TS-UNG agak rendah, dan ia boleh dioptimumkan dalam julat 20 ℃ ~ 37 ℃, dos enzim dan masa tindak balas boleh dioptimumkan dalam julat 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 min;dan enzim boleh dinyahaktifkan dalam proses transkripsi terbalik.
2.Ia sesuai untuk PCR dan RT-PCR untuk mengelakkan pencemaran.
3.Elakkan pencairan beku yang kerap, dan jangan dedahkan kepada turun naik suhu yang besar.
4.Gen yang berbeza untuk diperkuatkan mempunyai kecekapan penggunaan dUTP yang berbeza dan kepekaan terhadap enzim UNG, oleh itu, jika penggunaan sistem UNG membawa kepada penurunan sensitiviti pengesanan, sistem tindak balas harus diselaraskan dan dioptimumkan, jika anda memerlukan sokongan teknikal, sila hubungi syarikat kita.
