Perencat Rnase
Perencat Murine RNase ialah perencat RNase murine rekombinan yang dinyatakan dan disucikan daripada E.coli.Ia mengikat kepada RNase A, B atau C dalam nisbah 1:1 melalui ikatan bukan kovalen, dengan itu menghalang aktiviti tiga enzim dan melindungi RNA daripada degradasi.Walau bagaimanapun, Ia tidak berkesan terhadap RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H atau RNase dari Aspergillus.Inhibitor Murine RNase telah diuji oleh RT-PCR, RT-qPCR dan IVT mRNA, dan serasi dengan pelbagai transkripase Songsang komersial, polimerase DNA dan polimerase RNA.
Berbanding dengan perencat RNase manusia, perencat murine RNase tidak mengandungi dua sistein yang sangat sensitif terhadap pengoksidaan yang menyebabkan penyahaktifan perencat.Itu menjadikannya stabil pada kepekatan rendah DTT (kurang daripada 1 mM).Ciri ini menjadikannya sesuai untuk digunakan dalam tindak balas di mana kepekatan DTT yang tinggi adalah memudaratkan tindak balas (cth. RT-PCR Masa Nyata).
Application
Produk ini boleh digunakan secara meluas dalam mana-mana percubaan di mana gangguan RNase adalah mungkin untuk mengelakkan degradasi RNA, seperti:
1.Sintesis untaian pertama cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, dsb.
2.Melindungi RNA daripada degradasi semasa transkripsi/terjemahan in vitro (cth, sistem replikasi virus in vitro).
3.Perencatan aktiviti RNase semasa pemisahan dan pemurnian RNA.
Keadaan Penyimpanan
Produk boleh disimpan pada -25～- 15 ℃, sah selama 2 tahun.
Penimbal storan
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT dan 50% gliserol.
Definisi unit
Jumlah perencat RNase murine yang diperlukan untuk menghalang aktiviti 5ng ribonuclease A sebanyak 50% ditakrifkan sebagai satu unit (U).
Berat molekul protein
Berat molekul perencat RNase murine ialah 50 kDa.
Kawalan kualiti
Exonuclease Aktiviti:
40 U perencat RNase murine dengan 1 μg λ -Hind III mencerna DNA pada 37 ℃ selama 16 jam tidak menghasilkan degradasi seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel agarose.
Aktiviti Endonuklease:
40 U perencat RNase murine dengan 1μ g λ DNA pada 37 ℃ selama 16 jam tidak menghasilkan degradasi seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel agarose.
Mencuit Aktiviti:
40U perencat RNase murine dengan 1μ g pBR322 pada 37 ℃ selama 16 jam tidak menghasilkan degradasi seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel agarose.
RNase Aktiviti:
40U perencat RNase murine dengan 1.6μ g MS2 RNA selama 4j pada 37℃ tidak menghasilkan degradasi seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel agarose.
E.DNA coli:
40 U perencat RNase murine disaring untuk kehadiran DNA genomik E. coli menggunakan TaqMan qPCR dengan primer khusus untuk lokus rRNA E. coli 16S.Pencemaran DNA genom E. coli ialah ≤ 0.1 pg/40 U.
Notes
1.Ayunan atau kacau yang ganas akan menyebabkan enzim tidak aktif.
2. Julat suhu optimum perencat ini ialah 25-55 ℃, dan Ia dinyahaktifkan pada 65 ℃ dan ke atas.
3.Aktiviti RNase H, RNase 1 dan RNase T1 tidak dihalang oleh perencat RNase murine.
4. Perencatan aktiviti RNase didapati dalam julat pH yang luas (pH 5-9 semuanya aktif), dan aktiviti tertinggi diperhatikan pada pH 7-8.
5. Memandangkan ribonucleases lazimnya mengekalkan aktiviti di bawah keadaan denaturasi, penjagaan mesti diambil untuk mengelakkan penyahnatutan molekul Perencatan RNase yang telah kompleks dengan ribonuklease.Untuk mengelakkan pembebasan ribonuklease aktif, suhu lebih daripada 50 °C dan kepekatan tinggi urea atau agen denaturasi lain harus dielakkan.
