DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
No Kucing: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) ialah endodeoxyribonuclease yang boleh mencerna DNA untai tunggal atau dua.Ia mengiktiraf dan membelah ikatan fosfodiester untuk menghasilkan monodeoxynucleotides atau oligodeoxynucleotides beruntai tunggal atau dua dengan kumpulan fosfat pada terminal 5' dan hidroksil pada terminal 3'.Aktiviti DNase I bergantung kepada Ca2+dan boleh diaktifkan oleh ion logam divalen seperti Mn2+dan Zn2+.5 mM Ca2+melindungi enzim daripada hidrolisis.Dengan kehadiran Mg2+, enzim secara rawak boleh mengecam dan membelah mana-mana tapak pada mana-mana helai DNA.Di hadapan Mn2+, helai ganda DNA boleh dikenali dan dibelah secara serentak pada tapak yang hampir sama untuk membentuk serpihan DNA hujung rata atau serpihan DNA hujung melekit dengan 1-2 nukleotida menonjol.
Komponen
| Nama | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, bebas RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10 mL |
| Penampan 10×DNase I | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10 mL |
Keadaan penyimpanan
-25℃~-15℃ untuk penyimpanan;Pengangkutan di bawah pek ais.
Arahan
1. Sediakan larutan tindak balas dalam tiub bebas RNase mengikut perkadaran yang disenaraikan di bawah:
| Komponen | Kelantangan |
| RNA | X µg |
| 10 × Penampan DNase I | 1μL |
| DNase I, bebas RNase(5U/μL) | 1 U setiap µg RNA① |
| ddH2O | Sehingga 10μL |
Nota: ①Kira isipadu DNase I yang perlu ditambah berdasarkan jumlah RNA.
2. 37 ℃ selama 15 minit;
3. Tambah 0.5M EDTA kepada kepekatan akhir 2.5mM~5mM, dan panaskan pada 65℃ selama 10 minit untuk menghentikan tindak balas.Sampel boleh digunakan terus untuk tindak balas seterusnya seperti transkripsi terbalikeksperimen.
Definisi Unit
Satu unit ditakrifkan sebagai jumlah enzim yang akan merendahkan sepenuhnya 1µg pBR322DNA dalam 10 minit pada 37 ℃.
Kawalan kualiti
RNase:5U DNase I dengan 1.6µg MS2 RNA selama 4 jam pada 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi keranaditentukan oleh elektroforesis gel agarose.
Nota
1. Sila sediakan 0.5MEDTA sendiri.
2. Gunakan 1U DNase I setiap µg RNA.Walau bagaimanapun, jika RNA kurang daripada 1µg, sila gunakan 1U DNase I.
3. Sila letakkan enzim di atas ais semasa operasi.
