2×HiF Taq ditambah Master Mix
No Kucing: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (Dengan Pewarna) ialah penyelesaian 2×premix sedia untuk digunakan yang mengandungi Plus HIF DNA Polymerase, dNTP dan penimbal yang dioptimumkan.Dua antibodi monoklonal pada suhu bilik yang menghalang aktiviti polimerase dan aktiviti 3′→5′exonuclease ditambah kepada campuran induk untuk PCR Hot Start yang mudah dan sangat spesifik.Faktor lanjutan ditambah kepada campuran induk untuk memberikan enzim kapasiti penguatan serpihan yang panjang, panjang penguatan boleh sehingga 13 kb, enzim mempunyai aktiviti polimerase DNA 5′→3′ dan 3′→5′ aktiviti exonuclease, kesetiaannya adalah 83 kali ganda daripada polimerase DNA Taq, iaitu 9 kali ganda daripada polimerase DNA biasa.Ia sesuai untuk penguatan templat kompleks, produk penguatan adalah hujung yang tumpul.
2×HIF Taq plus Master Mix(Dengan Pewarna) mempunyai kelebihan cepat dan mudah, kepekaan tinggi, kekhususan yang kuat, kestabilan yang baik, dll., sistem tindak balas hanya perlu menambah primer dan templat, dan boleh dikuatkan dengan dua- protokol langkah, memudahkan langkah eksperimen dan menjimatkan masa.Produk ini mengandungi pewarna penunjuk elektroforesis, dan produk PCR boleh digunakan terus untuk elektroforesis.Di samping itu, produk ini juga mengandungi agen pelindung khusus, supaya campuran induk dapat mengekalkan aktiviti yang stabil selepas pencairan beku berulang.
Keadaan Penyimpanan
Produk hendaklah disimpan pada -25~-15℃ selama 1 tahun.
Spesifikasi
| Spesifikasi produk | Master Mix |
| penumpuan | 2× |
| Mula Panas | Permulaan Panas Terbina dalam |
| tidak terjual | Tumpul |
| Kelajuan tindak balas | Cepat |
| Saiz (Produk Akhir) | Sehingga 13kb |
| Syarat pengangkutan | Ais kering |
| Jenis produk | Premix PCR kesetiaan tinggi |
Arahan
1.Sistem Reaksi PCR
| Komponen | Isipadu (μL) |
| Templat DNA | sesuai |
| Primer hadapan (10 μmol/L) | 2.5 |
| Primer Terbalik (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq ditambah Master Mix | 25 |
| ddH2O | kepada 50 |
2.Penggunaan templat berbeza yang disyorkan
| Jenis templat | Besarkan serpihan daripada 1kb kepada 10 kb |
| DNA genomik | 50ng-200 ng |
| Plasmid atau DNA Viral | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2.5 µL (Jangan melebihi 10% daripada isipadu tindak balas PCR akhir) |
3.Protokol Penguatan
1) Protokol Dua Langkah (templat kerumitan)
| Langkah kitaran | Temp. | Masa | Kitaran |
| Denaturasi awal | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasi | 98 ℃ | 10 saat | 30-35 |
| Sambungan | 68 ℃ | 30 saat/kb | |
| Sambungan akhir | 72 ℃ | 5 minit | 1 |
2) Protokol Tiga Langkah (protokol biasa)
| Langkah kitaran | Temp. | Masa | Kitaran |
| Denaturasi awal | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasi | 98 ℃ | 10 saat | 30-35 |
| Penyepuhlindapan | 60 ℃ | 20 saat | |
| Sambungan | 72 ℃ | 30 saat/kb | |
| Sambungan akhir | 72 ℃ | 5 minit | 1 |
3) Protokol Gradien Penyepuhlindapan (templat kerumitan)
| Langkah kitaran | Suhu | Masa | Kitaran |
| Denaturasi awal | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasi | 98 ℃ | 10 saat | 15 (pengurangan 1 ℃ setiap kitaran) |
| Penyepuhlindapan kecerunan | 70-55 ℃ | 20 saat | |
| Sambungan | 72 ℃ | 30 saat/kb | |
| Denaturasi | 98 ℃ | 10 saat |
20 |
| Penyepuhlindapan | 55 ℃ | 20 saat | |
| Sambungan | 72 ℃ | 30 saat/kb | |
| Sambungan akhir | 72 ℃ | 5 minit | 1 |
Ciri di bawah protokol amplifikasi yang berbeza
| Protocol | Dua langkah | Tiga langkah | Penyepuhlindapan kecerunan |
| Spesifikasi | cepat | sederhana | lambat |
| Kekhususan | tinggi | sederhana | tinggi |
| hasil PCR | sederhana | tinggi | sederhana |
| Kadar pengesanan | tinggi | sederhana | tinggi |
Nota
Sila pakai PPE yang diperlukan, kot makmal dan sarung tangan, untuk memastikan kesihatan dan keselamatan anda!
