Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) ialah polipeptida beruntai tunggal yang mengandungi 4 ikatan disulfida dengan berat molekul kira-kira 13.7 kDa.RNase A ialah endoribonuclease yang secara khusus merendahkan RNA untai tunggal pada residu C dan U.Secara khusus, belahan mengiktiraf ikatan fosfodiester yang dibentuk oleh 5'-ribosa nukleotida dan kumpulan fosfat pada 3'-ribosa nukleotida pirimidin bersebelahan, supaya fosfat 2, 3'-siklik dihidrolisiskan kepada 3 yang sepadan. 'fosfat nukleosida (cth pG-pG-pC-pA-pG dibelah oleh RNase A untuk menjana pG-pG-pCp dan A-PG).RNase A adalah yang paling aktif dalam membelah RNA untai tunggal.Kepekatan kerja yang disyorkan ialah 1-100μG/mL, serasi dengan pelbagai sistem tindak balas.Kepekatan garam yang rendah (0-100 mM NaCl) boleh digunakan untuk memotong rantai RNA untai tunggal, RNA untai dua dan RNA yang dibentuk oleh hibridisasi RNA-DNA.Walau bagaimanapun, pada kepekatan garam yang tinggi (≥0.3 M), RNase A hanya secara khusus membelah RNA untai tunggal.
RNase A paling biasa digunakan untuk membuang RNA semasa penyediaan DNA plasmid atau DNA genomik. Sama ada DNase aktif atau tidak semasa proses penyediaan boleh menjejaskan tindak balas dengan mudah.Kaedah tradisional mendidih dalam mandi air boleh digunakan untuk menyahaktifkan aktiviti DNase.Produk ini tidak mengandungi DNase dan protease, dan tidak memerlukan rawatan haba sebelum digunakan.Selain itu, produk ini juga boleh digunakan dalam eksperimen biologi molekul seperti analisis perlindungan RNase dan analisis jujukan RNA.
Keadaan Penyimpanan
Produk boleh disimpan pada -25～-15℃, sah selama 2 tahun.
Arahan
Ini adalah salah satu kaedah biasa untuk menyediakan penyelesaian storan RNase A.Ia juga boleh disediakan olehkaedah lain mengikut kaedah tradisional di makmal atau literatur rujukan (sepertilarut secara langsung dalam 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 atau larutan Tris-NaCl)
1. Gunakan 10 mM natrium asetat (pH 5.2) untuk menyediakan 10 mg/mL larutan simpanan RNase A
2. Pemanasan pada 100 ℃ selama 15 min
3. Sejukkan pada suhu bilik, tambahkan 1/10 isipadu 1 M Tris-HCl (pH 7.4), laraskan pHnya kepada 7.4 (untukcontoh, tambah 500 ml larutan storan RNase 10g/ml 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Pembungkusan kecil pada -20 ℃ untuk penyimpanan beku, yang boleh stabil sehingga 2 tahun.
[Nota]: Apabila mendidih larutan RNaseA dalam keadaan neutral, pemendakan RNase akan terbentuk;Rebus pada pH yang lebih rendah, dan jika terdapat pemendakan, ia boleh diperhatikan, yang mungkin disebabkan oleh kehadiran kekotoran protein.Jika sedimen ditemui selepas mendidih, kekotoran boleh dikeluarkan dengan sentrifugasi berkelajuan tinggi (13000rpm), dan kemudian dibungkus untuk penyimpanan beku.
Informasi produk
| sinonim | Ribonuclease I;ribonuklease pankreas;Ribonuclease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS No. | 9001-99-4 |
| Penampilan | Serbuk lyophilized putih |
| Berat molekul | ~ 13.7kDa (jujukan asid amino) |
| Nilai Ph | 7.6 (julat aktiviti 6-10) |
| Suhu yang Sesuai | 60℃ (Julat aktiviti 15-70℃) |
| Agen pengaktifan | Na2+.K+ |
| Perencat | Perencat Rnase |
| Kaedah penyahaktifan | Tidak boleh dinyahaktifkan dengan pemanasan, adalah dicadangkan untuk menggunakan lajur centrifuge |
| asal usul | lembu |
| Keterlarutan | Larut dalam air (10mg/ml) |
| Rugi pada kering | ≤5.0% |
| Aktiviti enzim | ≥60 unit Kunitz/mg |
| Titik isoelektrik | 9.6 |
Nota
Untuk keselamatan dan kesihatan anda, sila pakai kot makmal dan sarung tangan pakai buang untuk operasi.
