Polimerase DNA Taq Liar
Taq DNA Polymerase ialah polimerase DNA termostabil daripada Thermus aquaticus YT-1, yang mempunyai aktiviti polimerase 5′→3′ dan aktiviti endonuklease flap 5′.
Komponen
| Komponen | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Penampan Taq | 2×1 mL | 2×10 mL | 2×50 mL | 5×200 mL |
| Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 5×10 mL |
Keadaan Penyimpanan
Pengangkutan di bawah 0°C dan disimpan pada -25°C~-15°C.
Definisi Unit
Satu unit ditakrifkan sebagai jumlah enzim yang menggabungkan 15 nmol dNTP ke dalam bahan tidak larut asid dalam 30 minit pada 75°C.
Kawalan kualiti
1.Ujian Ketulenan Protein (SDS-PAGE):Ketulenan polimerase DNA Taq adalah ≥95% ditentukan oleh analisis SDS-PAGE.
2.EndAktiviti onuclease:Sekurang-kurangnya 5 U polimerase DNA Taq dengan 1 μg λDNA selama 16 jam pada 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan seperti yang ditentukan.
3.Aktiviti Exonuclease:Sekurang-kurangnya 5 U polimerase DNA Taq dengan 1 μg λ -Hind Ⅲ mencerna DNA selama 16 jam pada suhu 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan seperti yang ditentukan.
4.Aktiviti Nickase:Sekurang-kurangnya 5 U polimerase DNA Taq dengan 1 μg pBR322 DNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan seperti yang ditentukan.
5.Aktiviti RNase:Sekurang-kurangnya 5 U polimerase DNA Taq dengan 1.6 μg MS2 RNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan seperti yang ditentukan.
6.E coliDNA:5 U polimerase DNA Taq disaring untuk kehadiran DNA genomik E. coli menggunakan TaqMan qPCR dengan primer khusus untuk lokus rRNA E. coli 16S.Pencemaran DNA genom E. coli ialah ≤1 Salinan.
7.Penguatan PCR (5.0 kb DNA Lambda)- Tindak balas 50 µL yang mengandungi 5 ng Lambda DNA dengan 5 unit Taq DNA Polymerase untuk 25 kitaran penguatan PCR menghasilkan produk 5.0 kb yang dijangkakan.
Persediaan Reaksi
| Komponen | Kelantangan |
| DNA templata | pilihan |
| Primer Hadapan 10 μM | 1 μL |
| Primer Songsang 10 μM | 1 μL |
| Campuran dNTP (10mM setiap satu) | 1 μL |
| Penampan 10×Taq | 5 μL |
| Taq DNA Polimeraseb | 0.25 μL |
| Air tanpa nukleus | Sehingga 50 μL |
Nota:
1) Kepekatan tindak balas optimum bagi templat berbeza adalah berbeza.Jadual berikut menunjukkan penggunaan templat yang disyorkan bagi sistem tindak balas 50 µL.
| DNA | Jumlah |
| Genomik | 1 ng-1 μg |
| Plasmid atau Viral | 1 ms-1 ng |
2) Kepekatan optimum Taq DNA Polymerase mungkin berkisar antara 0.25 µL~1 µL dalam aplikasi khusus.
ReaksiProgram
| Langkah | Suhu(°C) | Masa | Kitaran |
| Denaturasi awala | 95 ℃ | 5minit | - |
| Denaturasi | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Kitaran |
| Penyepuhlindapanb | 60 ℃ | 15 s | |
| Sambungan | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Sambungan Akhir | 72 ℃ | 5minit | - |
Nota:
1) Keadaan denaturasi awal sesuai untuk kebanyakan tindak balas penguatan dan boleh diubah suai mengikut kerumitan struktur templat.Jika struktur templat adalah kompleks, masa pra-pendenaturan boleh dilanjutkan kepada 5 – 10minit untuk menambah baik kesan denaturasi awal.
2) Suhu penyepuhlindapan perlu dilaraskan mengikut nilai Tm primer, yang biasanya ditetapkan kepada 3~5 ℃ lebih rendah daripada nilai Tm primer;Untuk templat yang kompleks, adalah perlu untuk melaraskan suhu penyepuhlindapan dan memanjangkan masa lanjutan untuk mencapai penguatan yang cekap.
