Perencat Rnase (bebas gliserol)
Perencat Murine RNase ialah perencat RNase murine rekombinan yang dinyatakan dan disucikan daripada E.coli.Ia mengikat kepada RNase A, B atau C dalam nisbah 1:1 melalui ikatan bukan kovalen, dengan itu menghalang aktiviti tiga enzim dan melindungi RNA daripada degradasi.Walau bagaimanapun, Ia tidak berkesan terhadap RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H atau RNase dari Aspergillus.Inhibitor Murine RNase telah diuji oleh RT-PCR, RT-qPCR dan IVT mRNA, dan serasi dengan pelbagai transkripase Songsang komersial, polimerase DNA dan polimerase RNA.
Berbanding dengan perencat RNase manusia, perencat murine RNase tidak mengandungi dua sistein yang sangat sensitif terhadap pengoksidaan yang menyebabkan penyahaktifan perencat.Itu menjadikannya stabil pada kepekatan rendah DTT (kurang daripada 1 mM).Ciri ini menjadikannya sesuai untuk digunakan dalam tindak balas di mana kepekatan DTT yang tinggi adalah memudaratkan tindak balas (cth. RT-PCR Masa Nyata).
Application
Produk ini boleh digunakan secara meluas dalam mana-mana percubaan di mana gangguan RNase adalah mungkin untuk mengelakkan degradasi RNA, seperti:
1. Sintesis cDNA untaian pertama, RT-PCR, RT-qPCR, dsb.;
2.Melindungi RNA daripada degradasi dalam transkripsi/terjemahan in-vitro (cth replikasi virus secara in vitro);
3. Perencatan aktiviti RNase semasa pengasingan dan penulenan RNA.
Keadaan Penyimpanan
Simpan pada -25～-15℃;
Kitaran beku-cair ≤ 5 kali;
Berlaku selama 1 tahun.
Definisi unit
Satu unit ditakrifkan sebagai jumlah Perencat RNase yang diperlukan untuk menghalang aktiviti 5 ng RNase A sebanyak 50%.
Berat molekul
Perencat RNase (bebas Gliserol) ialah protein 50 kDa.
Kawalan kualiti
Exonuclease Aktiviti:
Pengeraman 40 U enzim dengan 1 μg λ-Hind III mencerna DNA selama 16 jam pada suhu 37°C menyebabkan tiada degradasi DNA yang dapat dikesan seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel.
Aktiviti Endonuklease:
Pengeraman 40 U enzim dengan 1 μg λ DNA selama 16 jam pada suhu 37°C menyebabkan tiada degradasi DNA yang dapat dikesan seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel.
Mencuit Aktiviti:
Pengeraman 40 U enzim dengan 1 μg pBR322 selama 16 jam pada 37 ℃ menyebabkan tiada degradasi DNA yang dapat dikesan seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel.
RNase Aktiviti:
Pengeraman 40 U enzim dengan 1.6 μg MS2 RNA selama 4 jam pada 37 ℃ menyebabkan tiada degradasi RNA yang dapat dikesan seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel.
E.DNA coli:
40 U Enzim dikesan oleh TaqMan qPCR.DNA E.coli ialah ≤ 0. 1pg/40U.
Notes
1.Jangan goncang atau kacau dengan kuat untuk mengelakkan ketidakaktifan enzim.
2. Perencat RNase aktif pada suhu antara 25 ℃ hingga 55 ℃ dan dinyahaktifkan pada ≥65 ℃.
3.Aktiviti RNase H, RNase 1, dan RNase T1 tidak dihalang.
4. Julat pH untuk menghalang aktiviti RNase adalah luas (aktif pada pH 5-9), menunjukkan aktiviti maksimum pada pH 7-8.
