Kit Pengekstrakan DNA/RNA Virus
Kit ini sesuai untuk pengekstrakan pantas DNA/RNA virus ketulenan tinggi daripada sampel seperti swab nasofaring, swab persekitaran, supernatan kultur sel dan supernatan homogenat tisu.Kit ini berdasarkan teknologi penulenan membran silika yang menghapuskan keperluan untuk menggunakan pelarut organik fenol/kloroform atau pemendakan alkohol yang memakan masa untuk mengekstrak DNA/RNA virus berkualiti tinggi.Asid nukleik yang diperolehi adalah bebas daripada kekotoran dan sedia untuk digunakan dalam eksperimen hiliran seperti transkripsi terbalik, PCR, RT-PCR, PCR masa nyata, penjujukan generasi akan datang (NGS) dan Northern blot.
Keadaan penyimpanan
Simpan pada 15 ~ 25 ℃, dan angkut pada suhu bilik
Komponen
| Komponen | 100RXNS |
| Penampan VL | 50 ml |
| Penampan RW | 120 ml |
| ddH2 O tanpa RNase | 6 ml |
| Lajur RNA FastPure | 100 |
| Tiub Pengumpulan (2ml) | 100 |
| Tiub Koleksi tanpa RNase(1 .5ml) | 100 |
Penampan VL:Sediakan persekitaran untuk lisis dan pengikatan.
Penampan RW:Keluarkan sisa protein dan kekotoran lain.
ddH2O tanpa RNase:Mengeluarkan DNA/RNA daripada membran dalam lajur putaran.
Lajur RNA FastPure:Secara khusus menjerap DNA/RNA.
Tiub Koleksi 2 ml:Kumpul turasan.
Tiub Koleksi tanpa RNase 1.5 ml:Kumpul DNA/RNA.
Aplikasi
Swab nasofaring, swab persekitaran, supernatan kultur sel, dan supernatan homogenat tisu.
Mater yang bersedia sendiriials
Petua pipet bebas RNase, tiub emparan bebas RNase 1.5 ml, emparan, pengadun vorteks dan pipet.
Proses Eksperimen
Lakukan semua langkah berikut dalam kabinet biokeselamatan.
1. Tambahkan 200 μl sampel ke dalam tiub emparan bebas RNase (buat dengan PBS atau 0.9% NaCl sekiranya sampel tidak mencukupi), tambah 500 μl Penampan VL, gaul rata dengan memutar pusaran selama 15 – 30 saat, dan emparan secara ringkas untuk mengumpul campuran di bahagian bawah tiub.
2. Letakkan Lajur RNA FastPure dalam Tiub Koleksi 2 ml.Pindahkan campuran dari Langkah 1 ke Lajur RNA FastPure, sentrifuge pada 12,000 rpm (13,400 × g) selama 1 minit, dan buang turasan.
3. Tambahkan 600 μl Penampan RW ke Lajur RNA FastPure, sentrifuge pada 12,000 rpm (13,400 × g) selama 30 saat, dan buang turasan.
4. Ulangi Langkah 3.
5. Empar lajur kosong pada 12,000 rpm (13,400 × g) selama 2 min.
6. Pindahkan Lajur RNA FastPure dengan berhati-hati ke dalam Tiub Koleksi bebas RNase baharu 1.5 ml (disediakan dalam kit), dan tambah 30 – 50 μl ddH2O bebas RNase ke tengah membran tanpa menyentuh lajur.Biarkan berdiri pada suhu bilik selama 1 minit dan sentrifuge pada 12,000 rpm (13,400 × g) selama 1 minit.
7. Buang Lajur RNA FastPure.DNA/RNA boleh digunakan terus untuk ujian berikutnya, atau disimpan pada -30~ -15°C untuk tempoh yang singkat atau -85 ~-65°C untuk tempoh yang lebih lama.
Nota
Untuk kegunaan penyelidikan sahaja.Bukan untuk digunakan dalam prosedur diagnostik.
1. Seimbangkan sampel kepada suhu bilik terlebih dahulu.
2. Virus sangat berjangkit.Sila pastikan semua langkah keselamatan yang perlu diambil sebelum percubaan.
3. Elakkan pembekuan dan pencairan sampel berulang kali, kerana ini boleh menyebabkan degradasi atau pengurangan hasil DNA/RNA virus yang diekstrak.
4. Peralatan yang disediakan sendiri termasuk petua pipet bebas RNase, tiub emparan bebas RNase 1.5 ml, emparan, pengadun vorteks dan pipet.
5. Apabila menggunakan kit, pakai kot makmal, sarung tangan lateks pakai buang dan topeng pakai buang dan gunakan bahan habis pakai bebas RNase untuk meminimumkan risiko pencemaran RNase.
6. Lakukan semua langkah pada suhu bilik melainkan dinyatakan sebaliknya.
Mekanisme & Aliran Kerja
