Enzim UDG/UNG
UDG(urasil DNA glikosilase) boleh memangkinkan hidrolisis pautan N-glikosidik antara asas urasil dan tulang belakang gula-fosfat dalam ssDNA dan dsDNA.Ia boleh mengawal pencemaran aerosol dengan mudah dan sesuai untuk sistem biologi molekul biasa seperti PCR, qPCR, RT-qPCR dan LAMP.
Spesifikasi
| Hos Ekspresi | Rekombinan E. coliwith uracil DNA glikosilase gen |
| Berat Molekul | 24. 8kDa |
| Kesucian | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Penyahaktifan Haba | 95℃, 5~10 min |
| Definisi Unit | Satu unit (U) ditakrifkan sebagai jumlah enzim yang diperlukan untuk memangkinkan hidrolisis l μg dU yang mengandungi dsDNA dalam 30 minit pada 25 ℃. |
Penyimpanan
Produk hendaklah disimpan pada-25℃~-15°C selama dua tahun.
Arahan
1.Penyediaan campuran tindak balas PCR mengikut sistem berikut
| Komponen | Isipadu (μL) | Kepekatan akhir |
| Penampan 10×PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol/Leach |
| DNA templat | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Sehingga 50 | - |
Catatan: Mengikut keperluan eksperimen, kepekatan akhir dUTP boleh dilaraskan antara 0.2-0.6 mmol/L, dan 0.2 mmol/L dTTP boleh ditambah secara terpilih.
2.Prosedur penguatan
| Langkah kitaran | Suhu | Masa | Kitaran |
| degradasi templat yang mengandungi dU | 25 ℃ | 10minit | 1 |
| Pengaktifan UDG, denaturasi awal templat | 95 ℃ | 5~10minit | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 10 saat |
30-35 |
| Penyepuhlindapan | 60 ℃ | 20 saat | |
| Sambungan | 72 ℃ | 30 saat/kb | |
| Sambungan akhir | 72 ℃ | 5 minit | 1 |
Catatan: Masa tindak balas pada 25°C boleh dilaraskan dalam masa 5-10 minit mengikut keperluan eksperimen.
Nota
1.UDG aktif dalam kebanyakan penimbal tindak balas PCR.
2.Enzim hendaklah disimpan di dalam peti ais atau di atas tab mandi ais apabila digunakan, dan hendaklah disimpan pada suhu 20°C serta-merta selepas digunakan.
3.Sila pakai PPE yang diperlukan, kot makmal dan sarung tangan, untuk memastikan kesihatan dan keselamatan anda!
