Bst 2.0 DNA Polimerase (bebas gliserol)
Bst DNA polymerase V2 berasal daripada Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, yang mempunyai aktiviti polimerase DNA 5′→3′ dan aktiviti penggantian rantai yang kuat, tetapi tiada aktiviti exonuclease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 sangat sesuai untuk anjakan helai, LAMPU penguatan isoterma (Penguatan isoterma pengantara gelung) dan penjujukan pantas.
Komponen
| Komponen | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimerase V2(Bebas gliserol)(8U/μL) | 0.2 mL | 1 mL | 10 mL |
| Penampan 10×HC Bst V2 | 1.5 mL | 2×1.5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5 mL | 2×1.5 mL | 2×10 mL |
Aplikasi
1.LAMP penguatan isoterma
2.Tindak balas anjakan tunggal untai DNA
3. Penjujukan gen GC tinggi
4.Penjujukan DNA tahap nanogram.
Keadaan Penyimpanan
Pengangkutan di bawah 0°C dan disimpan pada -25°C~-15°C.
Definisi Unit
Satu unit ditakrifkan sebagai jumlah enzim yang menggabungkan 25 nmol dNTP ke dalam bahan tidak larut asid dalam 30 minit pada 65°C.
Kawalan kualiti
1.Ujian Ketulenan Protein (SDS-PAGE):Ketulenan Bst DNA polimerase V2 adalah ≥99% ditentukan oleh analisis SDS-PAGE menggunakan pengesanan Coomassie Blue.
2.Aktiviti Exonuclease:Pengeraman tindak balas 50 μL yang mengandungi sekurang-kurangnya 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1 μg λ -Hind Ⅲ mencerna DNA selama 16 jam pada suhu 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan seperti yang ditentukan.
3.Aktiviti Nickase:Pengeraman tindak balas 50 μL yang mengandungi sekurang-kurangnya 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1 μg pBR322 DNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan seperti yang ditentukan.
4.Aktiviti RNase:Pengeraman tindak balas 50 μL yang mengandungi sekurang-kurangnya 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1.6 μg MS2 RNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan seperti yang ditentukan.
5.DNA E. coli:120 U Bst DNA polimerase V2 disaring untuk kehadiran DNA genomik E. coli menggunakan TaqMan qPCR dengan primer khusus untuk lokus rRNA E. coli 16S.Pencemaran DNA genom E. coli ialah ≤1 Salinan.
Reaksi LAMP
| Komponen | 25μL |
| Penampan 10×HC Bst V2 | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTP (10mM setiap satu) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 Hijau (25×)a | 1.0 μL |
| Campuran primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (bebas gliserol) (8 U/uL) | 1 μL |
| templat | × μL |
| ddH₂O | Sehingga 25 μL |
Nota:
1) a.SYTOTM 16 Hijau (25×): Mengikut keperluan eksperimen, pewarna lain boleh digunakan sebagai pengganti;
2) b.Campuran primer: diperoleh dengan mencampurkan 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB dan volum lain.
Reaksi dan Keadaan
1 × Penampan HC Bst V2, suhu pengeraman adalah antara 60°C dan 65°C.
Penyahaktifan Haba
80 °C, 20 minit
