Permulaan Hangat Bst 2.0 DNA Polimerase (Bebas Gliserol)
Bst DNA polymerase V2 berasal daripada Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, yang mempunyai aktiviti polimerase DNA 5′→3′ dan aktiviti penggantian rantai yang kuat, tetapi tiada aktiviti exonuclease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 sangat sesuai untuk anjakan helai, LAMPU penguatan isoterma (Penguatan isoterma pengantara gelung) dan penjujukan pantas.Bst DNA polymerase V2 ialah versi hot-start berdasarkan Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) yang diperolehi oleh teknologi pengubahsuaian boleh balik, yang boleh menghalang aktiviti polimerase DNA pada suhu bilik, jadi sistem tindak balas boleh dikendalikan dan dirumuskan pada suhu bilik untuk mengelakkan bukan -penguatan khusus dan meningkatkan kecekapan tindak balas, dan versi ini boleh diliofilkan.Di samping itu, aktivitinya dilepaskan pada suhu tinggi, jadi tidak ada keperluan untuk langkah pengaktifan yang berasingan.
Komponen
| Komponen | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polimerase V2 (Bebas gliserol)(8U/μL) | 0.2 mL | 1 mL | 10 mL |
| Penampan 10×HC Bst V2 | 1.5 mL | 2×1.5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5 mL | 2×1.5 mL | 2×10 mL |
Aplikasi
1.LAMPU penguatan isoterma
2.Tindak balas anjakan tunggal untai DNA
3.Penjujukan gen GC tinggi
4.Penjujukan DNA tahap nanogram.
Keadaan Penyimpanan
Pengangkutan di bawah 0°C dan disimpan pada -25°C~-15°C.
Definisi Unit
Satu unit ditakrifkan sebagai jumlah enzim yang menggabungkan 25 nmol dNTP ke dalam bahan tidak larut asid dalam 30 minit pada 65°C.
Kawalan kualiti
1.Ujian Ketulenan Protein (SDS-PAGE):Ketulenan Bst DNA polimerase V2 adalah ≥99% ditentukan oleh analisis SDS-PAGE menggunakan pengesanan Coomassie Blue.
2.EndonukleaseAktiviti:Pengeraman tindak balas 50 μL yang mengandungi sekurang-kurangnya 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1 μg λDNA selama 16 jam pada 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan seperti yang ditentukan.
3.Aktiviti Exonuclease:Pengeraman tindak balas 50 μL yang mengandungi sekurang-kurangnya 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1 μg λ -Hind Ⅲ mencerna DNA selama 16 jam pada suhu 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan seperti yang ditentukan.
4.Aktiviti Nickase:Pengeraman tindak balas 50 μL yang mengandungi sekurang-kurangnya 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1 μg pBR322 DNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan seperti yang ditentukan.
5.Aktiviti RNase:Pengeraman tindak balas 50 μL yang mengandungi sekurang-kurangnya 8 U Bst DNA polimerase V2 dengan 1.6 μg MS2 RNA selama 16 jam pada suhu 37°C tidak menghasilkan degradasi yang dapat dikesan seperti yang ditentukan.
6.E coliDNA:120 U Bst DNA polimerase V2 disaring untuk kehadiran DNA genomik E. coli menggunakan TaqMan qPCR dengan primer khusus untuk lokus rRNA E. coli 16S.Pencemaran DNA genom E. coli ialah ≤1 Salinan.
Reaksi LAMP
| Komponen | 25μL |
| Penampan 10×HC Bst V2 | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTP (10mM setiap satu) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 Hijau (25×)a | 1.0 μL |
| Campuran primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (bebas gliserol) (8 U/uL) | 1 μL |
| templat | × μL |
| ddH₂O | Sehingga 25 μL |
Nota:
1) a.SYTOTM 16 Hijau (25×): Mengikut keperluan eksperimen, pewarna lain boleh digunakan sebagai pengganti;
2) b.Campuran primer: diperoleh dengan mencampurkan 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB dan volum lain.
Reaksi dan Keadaan
1 × Penampan HC Bst V2, suhu pengeraman adalah antara 60°C dan 65°C.
Penyahaktifan Haba
80°C, 20minit
