Robusstart Taq DNA Polymerase
Robusstart Taq DNA Polymerase ialah polimerase DNA permulaan yang panas.Produk ini bukan sahaja boleh menghalang tindak balas tidak spesifik yang disebabkan oleh penyepuhlindapan primer atau pengagregatan primer yang tidak spesifik dalam proses penyediaan dan penguatan sistem PCR.Oleh itu, ia mempunyai kekhususan yang sangat baik dan lebih berkesan untuk penguatan templat kepekatan rendah, dan ia sesuai untuk tindak balas penguatan PCR berganda.Selain itu, produk ini mempunyai kebolehgunaan yang sangat baik, dan keputusan penguatan yang stabil boleh diperolehi dalam pelbagai jenis tindak balas PCR.
Komponen
1.5 U/μL Robusstart Taq DNA polimerase
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ bebas) (pilihan)
3.25 mM MgCl2(pilihan)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ bebas) tidak mengandungi dNTP dan Mg²+, sila tambah dNTP dan MgCl2semasa menyediakan sistem tindak balas.
Permohonan yang Disyorkan
1.Penguatan pantas.
2.Penguatan berbilang.
3.Penguatan langsung darah, swab, dan sampel lain.
4.Pengesanan penyakit pernafasan.
Keadaan Penyimpanan
-20°C untuk penyimpanan jangka panjang, hendaklah dicampur dengan baik sebelum digunakan, elakkan kerap beku-cair.
*Jika pemendakan berlaku selepas penyejukan, ia adalah perkara biasa;adalah disyorkan untuk mengimbangi suhu bilik sebelum mencampur dan digunakan.
Definisi Unit
Satu unit aktif (U) ditakrifkan sebagai jumlah enzim yang menggabungkan 10 nmol deoksiribonukleotida ke dalam bahan tidak larut asid pada 74°C selama 30 minit menggunakan DNA sperma salmon diaktifkan sebagai templat/primer.
Kawalan kualiti
1.Ketulenan elektroforesis SDS-PAGE lebih daripada 98%.
2.Kepekaan amplifikasi, kawalan kelompok ke kelompok, kestabilan.
3.Tiada aktiviti nuklease eksogen, tiada pencemaran endonuklease eksogen atau exonuklease
Arahan
Persediaan Reaksi
| Komponen | Jilid (μL) | Kepekatan Akhir |
| 10 × PCR Buffer II (Mg²+ bebas)a | 5 | 1× |
| dNTP (10mM setiap dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robusstart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
| 25 × Campuran primerb | 2 | 1× |
| templat | - | ＜ 1 μg/tindak balas |
| ddH2O | Ke 50 | - |
Nota:
1) a.Penampan tidak mengandungi dNTP dan Mg²+, sila tambah dNTP dan MgCl2semasa menyediakan sistem tindak balas.
2) b.Jika digunakan untuk qPCR/qRT-PCR, probe pendarfluor perlu ditambah pada sistem tindak balas.Biasanya, kepekatan primer akhir 0.2 μM akan memberikan hasil yang baik;jika prestasi tindak balas adalah lemah, kepekatan primer boleh dilaraskan dalam julat 0.2-1 μM.Kepekatan probe biasanya dioptimumkan dalam julat 0.1-0.3 μM.Eksperimen kecerunan kepekatan boleh dilakukan untuk mencari gabungan primer dan probe yang terbaik.
Protokol berbasikal terma
| PCR biasaproses | |||
| Langkah | Suhu | Masa | Kitaran |
| Pra-denaturasi | 95 ℃ | 1-5 min | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 10-20 saat | 40-50 |
| Penyepuhlindapan / Sambungan | 56-64 ℃ | 20-60 saat | |
| PCR pantasproses | |||
| Langkah | Suhu | Masa | Kitaran |
| Pra-denaturasi | 95 ℃ | 30 saat | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 1-5 saat | 40-45 |
| Penyepuhlindapan / Sambungan | 56-64 ℃ | 5-20 saat | |
Nota
1.Kadar penguatan polimerase DNA pantas tidak boleh kurang daripada 1 kb/10 s.Kadar kenaikan dan penurunan suhu, mod kawalan suhu dan kecekapan pengaliran haba bagi instrumen PCR yang berbeza sangat berbeza, jadi adalah disyorkan untuk mengoptimumkan keadaan tindak balas yang optimum untuk instrumen PCR pantas tertentu.
2.Sistem ini sangat mudah disesuaikan, dengan kekhususan dan kepekaan yang lebih tinggi.
3.Sesuai untuk digunakan sebagai reagen pengesanan PCR sensitiviti tinggi, dan boleh digunakan dalam tindak balas penguatan PCR multipleks.
4.Aktiviti polimerase 5′→3′, aktiviti exonuclease 5′→3′;tiada aktiviti exonuclease 3′→5′;tiada fungsi proofreading.
5.Sesuai untuk ujian kualitatif dan kuantitatif PCR dan RT-PCR.
6.Hujung 3' produk PCR ialah A, yang boleh diklon terus ke dalam vektor T.
7.Kaedah tiga langkah disyorkan untuk primer dengan suhu penyepuhlindapan rendah atau untuk penguatan serpihan lebih lama daripada 200 bp.
