Premix Probe qPCR Multiplex
No Kucing: HCB5051A
TaqMan multipleks qPCR Master Mix (Berasaskan Pewarna) ialah pra-penyelesaian untuk 2 × penguatan PCR kuantitatif masa nyata yang dicirikan oleh kepekaan dan kekhususan yang tinggi, yang berwarna biru, dan mempunyai kesan penambahan sampel.Produk ini ialah reagen pracampuran 2× Campuran yang membolehkan sehingga empat tindak balas PCR kuantitatif pendarfluor dalam satu telaga tindak balas.Produk ini mengandungi kaedah antibodi yang diubah suai secara genetik kepada enzim Taq permulaan panas, meningkatkan kepekaan dan kekhususan amplifikasi.Pada masa yang sama, produk ini telah mengoptimumkan penimbal berbilang tindak balas secara mendalam, yang boleh meningkatkan kecekapan penguatan tindak balas dan menggalakkan penguatan berkesan templat kepekatan rendah.Produk ini boleh digunakan untuk genotaip dan analisis kuantitatif multipleks.
Spesifikasi
| Mula Panas | Permulaan panas terbina dalam |
| Kaedah pengesanan | Pengesanan kuar primer |
| kaedah PCR | qPCR |
| Polimerase | Taq DNA polimerase |
| Jenis sampel | DNA |
Keadaan Penyimpanan
Produk dihantar dengan ais kering dan boleh disimpan pada -25~-15℃ selama 2 tahun.
Arahan
1. Tindak balasSistem
| Komponen | Isipadu (μL) | Kepekatan Akhir |
| 2× TaqMan multipleks qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Campuran primer (10 μmol/L) a | × | 0.1 - 0.5 μmol/L |
| Campuran probe (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| pewarna rujukan Rox | 0.5 | 1× |
| Templat DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | sehingga 25 | - |
Nota:Campurkan dengan teliti sebelum digunakan untuk mengelakkan gelembung berlebihan daripada goncangan yang kuat.
a.Kepekatan primer: Campuran Primer mengandungi berbilang pasang primer, biasanya setiap primer pada kepekatan akhir 0.2 μmol/L dan juga boleh dilaraskan antara 0.1 dan 0.5 μmol/L mengikut kesesuaian.
b.Kepekatan Probe: Probe Mix mengandungi berbilang probe dengan isyarat pendarfluor berbeza, dan kepekatan setiap probe boleh dilaraskan antara 50 dan 250 nmol/L mengikut situasi tertentu.
1.Rujukan pewarna Rox: Ia digunakan pada instrumen penguatan PCR Masa Nyata seperti Applied Biosystems untuk membetulkan ralat isyarat pendarfluor yang dijana antara telaga;produk ini tidak mengandungi rujukan pewarna Rox.Cas#10200 disyorkan jika perlu.
2.Pencairan templat: qPCR sangat sensitif, dan disyorkan untuk mencairkan templat untuk digunakan.Jika templat ialah penyelesaian stok cDNA, volum templat tidak boleh melebihi 1/10 daripada jumlah volum.
3.Sistem tindak balas: 25μL, 30μL atau 50 μL disyorkan untuk memastikan keberkesanan dan kebolehulangan penguatan gen sasaran.
4.Penyediaan sistem: Sila sediakan di bangku yang sangat bersih, dan gunakan petua dan tiub tindak balas tanpa sisa nuklease;adalah disyorkan untuk menggunakan petua dengan kartrij penapis.Elakkan pencemaran silang dan pencemaran aerosol.
2.Program tindak balas
| Langkah kitaran | Temp. | Masa | Kitaran |
| Penyahnatuan awal | 95 ℃ | 5minit | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 15 saat | 45 |
| Penyepuhlindapan/Pelanjutan | 60 ℃ | 30 saat |
Nota:
1.Penyepuhlindapan/Pelanjutan: Suhu dan masa boleh dilaraskan dengan sewajarnya mengikut nilai Tm primer yang direka bentuk.
2.Pemerolehan isyarat pendarfluor: Masa pemerolehan isyarat pendarfluor yang diperlukan untuk instrumen pengesanan qPCR berbeza adalah berbeza, sila tetapkan mengikut had masa minimum.Masa beberapa instrumen biasa ditetapkan seperti berikut:
20 saat: Gunaan Biosistem 7700, 7900HT, 7500 Cepat
31 saat: Gunaan Biosistem 7300
32 saat: Gunaan Biosistem 7500
Nota
Sila pakai PPE yang diperlukan, kot makmal dan sarung tangan, untuk memastikan kesihatan dan keselamatan anda!
