Kit CHO HCP ELISA
Kaedah ELISA imunosorben Satu langkah digunakan dalam ujian ini.Sampel yang mengandungi CHOK1 HCP serentak bertindak balas dengan antibodi anti-CHOK1 kambing berlabel HRP dan antibodi anti-CHOK1 bersalut pada plat ELISA, akhirnya membentuk kompleks sandwic antibodi berlabel antibodi-HCP fasa pepejal.Antigen-antibodi yang tidak terikat boleh dikeluarkan dengan membasuh plat ELISA.Substrat TMB ditambah ke dalam perigi untuk tindak balas yang mencukupi.Perkembangan warna dihentikan selepas menambah larutan henti, dan nilai OD atau penyerapan larutan tindak balas pada 450/650nm dibaca dengan pembaca plat mikro.Nilai OD atau nilai penyerapan adalah berkadar dengan kandungan HCP dalam larutan.Daripada ini, kepekatan HCP dalam larutan boleh dikira mengikut lengkung piawai.
Permohonan
Kit ini digunakan untuk mengesan secara kuantitatif kandungan sisa protein sel hos CHOK1 dalam sampel.
Clawan
| S/N | Komponen | penumpuan | Keadaan Penyimpanan |
| 1 | Piawaian CHOK1 HCP | 0.5mg/mL | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–20 ℃, melindungi daripada cahaya |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, melindungi daripada cahaya |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Hentikan penyelesaian | NA | RT |
| 6 | Pengedap mikroplate | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Plat pra salutan penjerapan tinggi | NA | 2-8 ℃ |
Peralatan Diperlukan
| Bahan habis pakai / Peralatan | pembuatan | Katalog |
| Pembaca plat mikro | Peranti Molekul | Spectra Max M5, M5e, atau setara |
| Termomik | Eppendorf | Eppendorf/5355, atau setara |
| Pengadun vorteks | IKA | MS3 Digital, atau setara |
Penyimpanan dan kestabilan
1.Pengangkutan pada -25~-15°C.
2.Keadaan penyimpanan adalah seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 1;komponen 1-2 disimpan ≤–20°C, 5-6 disimpan RT,3、4、7、8 disimpan pada 2-8 ℃;tempoh sah laku ialah 12 bulan.
Parameter produk
1.Kepekaan: 1ng/mL
2.Julat pengesanan: 3- 100ng/mL
3.Kepersisan: Intra-assay CV≤ 10%, inter- assay CV≤ 15%
4.Liputan HCP: >80%
5.Kekhususan: Kit ini adalah universal kerana ia bertindak balas secara khusus dengan CHOK1 HCP bebas daripada proses penulenan.
Penyediaan reagen
1.PBST 0.05%
Ambil 15 ml 20×PBST 0.05%, dicairkan dalam ddH2O, dan dibuat sehingga 300 ml.
2.1.0% BSA
Ambil 1g BSA dari botol dan cairkan dalam 100 ml PBST 0.05%, gaul rata sehingga larut sepenuhnya, dan simpan pada suhu 2-8°C.Penampan pencairan yang disediakan adalah sah selama 7 hari.Adalah disyorkan untuk menyediakan seperti yang diperlukan.
3.Larutan pengesanan 2μg/mL
Ambil 48μL 0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP dan cairkan dalam 11,952μL 1% BSA untuk mendapatkan kepekatan akhir larutan pengesanan 2μg/mL.
4.QC dan Penyediaan Piawaian CHOK1 HCP
| tiub Tidak. | Asal | penumpuan | Kelantangan | 1%BSA | jumlah Isipadu | Akhir |
| A | Standard | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Jadual: Penyediaan QC dan Standard
Prosedur Ujian
1.Sediakan reagen seperti yang ditunjukkan dalam "Penyediaan Reagen" di atas.
2.Ambil 50μL piawai, sampel dan QC (rujuk Jadual 3) ke dalam setiap telaga, kemudian tambah 100μL larutan Pengesanan (2μg/mL);Tutup plat dengan pengedap, dan letakkan plat ELISA pada pengadun termo.Inkubasi pada 500rpm, 25±3℃ selama 2 jam.
3.Terbalikkan plat mikro dalam sinki dan buang larutan salutan.Pipet 300μL PBST 0.05% ke dalam setiap telaga untuk mencuci plat ELISA dan buang larutan, dan ulangi pencucian 3 kali.Terbalikkan pinggan pada tuala kertas bersih dan keringkan.
4.Tambah 100μL substrat TMB (lihat Jadual 1) pada setiap perigi, tutup plat ELISA, dan inkubasi dalam gelap pada 25±3 ℃ selama 15 minit.
5.Pipet 100μL larutan henti ke dalam setiap telaga.
6.Ukur penyerapan pada panjang gelombang 450/650nm dengan pembaca plat mikro.
7.Analisis data menggunakan SoftMax atau perisian yang setara.Plot keluk piawai dengan menggunakan model regresi logistik empat parameter.
Contoh Lengkung Piawai
NOTA: Jika kepekatan HCP dalam sampel melebihi had atas lengkung piawai, ia perlu dicairkan dengan betul dengan penimbal pencairan sebelum ujian.
NOTA
Penyelesaian hentian ialah asid sulfurik 2M, sila kendalikan dengan berhati-hati untuk mengelakkan percikan!
