5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
No Kucing: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) ialah campuran berasaskan probe satu tiub yang sangat stabil sesuai untuk transkripsi terbalik satu langkah dan PCR kuantitatif (qRT-PCR).Ia menyokong pra-pencampuran primer dan probe dan kekal stabil selepas penyimpanan lama pada suhu rendah.Sampel yang akan diuji boleh ditambah secara langsung apabila menggunakan, tanpa operasi pembukaan/pem paip tambahan.Produk ini menyediakan komponen, cth polimerase DNA permulaan panas, M-MLV, glikosilase DNA urasil tahan haba (TS-UNG), Perencat RNase, MgCl2, dNTP (dengan dUTP dan bukannya dTTP), dan penstabil.Dengan transkripase terbalik penguatan pesat yang diubah suai secara genetik dan polimerase DNA, adalah mungkin untuk menyelesaikan penguatan PCR dalam masa 20-40 minit.Reagen ini menggunakan penimbal khas untuk qPCR dengan enzim campuran enzim penguat anti-perencatan dan enzim UNG.Oleh itu, ia boleh mendapatkan penguatan gen sasaran yang baik dan mencegah penguatan palsu yang disebabkan oleh pencemaran sisa PCR dan aerosol.Reagen ini serasi dengan kebanyakan instrumen PCR kuantitatif pendarfluor daripada pengeluar seperti Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad dan Roche.
Komponen
1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix
2.5×Penimbal Pracampuran RT Cepat Neoscript (dUTP)
Keadaan Penyimpanan
Semua komponen hendaklah disimpan pada suhu -20 ℃ untuk penyimpanan jangka panjang dan 4 ℃ sehingga 3 bulan.Sila campurkan dengan teliti selepas dicairkan dan sentrifuge sebelum digunakan.Elakkan pencairan beku yang kerap.
Penyediaan Sistem Reaksi qRT-PCR
| Komponen | 25μLSistem | 50μLSistem | Kepekatan Akhir |
| 5×Penimbal Pracampuran RT Cepat Neoscript (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix | 1μL | 2μL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mixa | 1μL | 2μL | 1× |
| Templat RNAb | – | – | – |
| ddH2O | Sehingga 25μL | Sehingga 50μL | – |
1) a.Kepekatan akhir primer biasanya 0.2μM.Untuk hasil yang lebih baik, kepekatan primer boleh dioptimumkan dalam julat 0.2-1μM.Secara amnya, kepekatan probe boleh dioptimumkan dalam julat 0.1-0.3μM.
2) b. Apabila menggunakan Prosedur PCR yang pantas, meningkatkan kepekatan primer dan probe boleh menghasilkan hasil penguatan yang lebih baik, dan nisbahnya harus dioptimumkan sewajarnya.
3) Jenis sampel yang berbeza mengandungi jenis dan kandungan perencat dan nombor salinan gen sasaran yang berbeza.Jumlah sampel hendaklah dipertimbangkan mengikut keadaan sebenar.Buat pencairan sampel dengan air bebas nuklease atau Penampan TE, jika perlu.
Tindak balas Conditions
| Prosedur PCR biasa | Prosedur PCR Pantas | ||||||
| Prosedur | Temp. | Masa | Kitaran | Prosedur | Temp. | Masa | Kitaran |
| Transkripsi Songsang | 50 ℃ | 10-20minit | 1 | Transkripsi Songsang | 50 ℃ | 5minit | 1 |
| Polimerase Pengaktifan | 95 ℃ | 1-5minit | 1 | Polimerase Pengaktifan | 95 ℃ | 30-an | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 | Denaturasi | 95 ℃ | 1-3s | 40-50 |
| Penyepuhlindapan dan Sambungan | 56-64 ℃ | 20-60an | Penyepuhlindapan dan Sambungan | 56-64 ℃ | 3-20s | ||
Kawalan kualiti
1.Pengesanan fungsi: sensitiviti, kekhususan dan kebolehulangan qPCR.
2.Tiada aktiviti nuklease eksogen: tiada pencemaran endonuklease eksogen dan eksonuklease.
Nota
1.Kadar penguatan polimerase DNA pantas tidak kurang daripada 1kb/10s.Instrumen PCR yang berbeza mempunyai kelajuan pemanasan dan penyejukan yang berbeza, mod kawalan suhu dan kekonduksian terma, dan oleh itu pengoptimuman kepekatan primer/probe anda dan kaedah berjalan dalam kombinasi dengan instrumen PCR pantas khusus anda adalah penting.
2.Produk ini melaksanakan kebolehgunaan yang luas, dan ia sesuai untuk diagnosis molekul sensitiviti tinggi.Kaedah PCR tiga langkah disyorkan untuk primer dengan suhu penyepuhlindapan rendah atau untuk penguatan serpihan panjang melebihi 200 bp.
3.Memandangkan amplikon yang berbeza mempunyai kecekapan penggunaan dUTP yang berbeza dan sensitiviti yang berbeza kepada UNG, reagen harus dioptimumkan jika sensitiviti pengesanan berkurangan apabila menggunakan sistem UNG.Sila hubungi kami untuk mendapatkan sokongan teknikal jika perlu.
4.Untuk mengelakkan penguatan produk PCR bawaan, kawasan eksperimen khusus dan pipet diperlukan untuk amplifikasi.Kendalikan dengan sarung tangan dan tukar dengan kerap dan jangan buka tiub PCR selepas amplifikasi.
