2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
No Kucing: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) direka untuk melakukan PCR terus daripada sampel tanpa pengekstrakan DNA atau penyediaan sampel.Reagen ini terdiri daripada polimerase DNA permulaan panas, urasil DNA glikosilase (UNG), Perencat RNase, MgCl2, dNTP (dengan dUTP dan bukannya dTTP), dan penstabil, untuk PCR kuantitatif (qPCR).Reagen ini mendahului toleransi perencat yang tinggi, dan dengan itu ia boleh digunakan secara langsung untuk pengesanan sampel seperti swab tekak, air liur, darah keseluruhan anti-pembekuan, plasma dan serum tanpa pengekstrakan DNA.Reagen menggunakan penimbal proprietari untuk qPCR dengan enzim campuran polimerase DNA anti-perencatan dan enzim UNG.Oleh itu, ia boleh mendapatkan penguatan gen sasaran yang baik dalam sampel yang mengandungi perencat dan menghalang penguatan positif palsu yang disebabkan oleh pencemaran sisa PCR dan aerosol.Reagen ini serasi dengan kebanyakan instrumen PCR kuantitatif pendarfluor, seperti Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche dan sebagainya.
Komponen
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. Penampan Pracampuran 2×SensiDirect (dUTP)
Keadaan penyimpanan
Semua komponen hendaklah disimpan pada suhu -20 ℃ untuk penyimpanan jangka panjang dan 4 ℃ sehingga 3 bulan.Sila campurkan dengan teliti selepas dicairkan dan sentrifuge sebelum digunakan.Elakkan pencairan beku yang kerap.
Protokol Berbasikal
| Langkah | Suhu | Masa | Kitaran |
| Pencernaan | 50 ℃ | 2minit | 1 |
| Pengaktifan polimerase | 95 ℃ | 1-5min | 1 |
| Denatur | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 |
| Penyepuhlindapan/Pelanjutan | 56-64 ℃ | 20-60an |
Arahan Pipet
| Reagen | Jumlah per tindak balas | Isipadu setiap tindak balas | Kepekatan Akhir |
| 2×Penimbal Pracampuran SensiDirect (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Sampel3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Jumlah isipadu | 25 μL | 50 μL | - |
1. Kepekatan akhir primer biasanya 0.2μM.Untuk hasil yang lebih baik, kepekatan primer boleh dioptimumkan dalam julat 0.2-1μM.
2. Secara amnya, kepekatan probe boleh dioptimumkan dalam julat 0.1-0.3μM.Kepekatan optimum probe adalah berkaitan dengan instrumen amplifikasi PCR masa nyata, jenis probe, dan jenis bahan pelabelan pendarfluor.Sila rujuk manual instrumen atau keperluan khusus setiap probe pendarfluor.
3. Jenis sampel yang berbeza mengandungi jenis dan kandungan perencat dan nombor salinan gen sasaran yang berbeza.Jumlah sampel hendaklah dipertimbangkan mengikut keadaan sebenar.Buat pencairan sampel dengan menambah air bebas nuklease atau Penampan TE, jika perlu.
4. Jumlah sampel berbeza yang disyorkan:
| Sampel | Jilid untuk satu 50 μL tindak balas | maksimum nisbah |
| Darah keseluruhan antikoagulasi | 2.5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| Sapu tekak | 10 μL | 20% |
| air liur | 10 μL | 20% |
Kawalan kualiti
1. Pengesanan fungsi: sensitiviti, kekhususan dan kebolehulangan qPCR.
2. Tiada aktiviti nuklease eksogen: tiada pencemaran endonuklease eksogen dan eksonuklease.
Nota Produk
1. Produk ini menggunakan jenis baru polimerase DNA permulaan panas, yang boleh diaktifkan dalam 1-5 minit. Memandangkan penimbal tindak balasnya telah dioptimumkan, ia lebih sesuai untuk PCR kuantitatif pendarfluor dua atau berbilang menggunakan kaedah probe.
2. Jika nilai Rn amplifikasi PCR terlalu rendah atau amplifikasi jelas terhalang, mengurangkan jumlah sampel, meningkatkan jumlah tindak balas atau pencairan sampel sebelumnya boleh meningkatkan keputusan.
3. Pengumpulan darah, air liur, air kencing, sapuan tekak, dsb. hendaklah mengikut keperluan kriteria klinikal, dan sampel segar boleh digunakan untuk mengelakkan degradasi asid nukleik.
4. Oleh kerana amplikon yang berbeza mempunyai kecekapan penggunaan yang berbeza kepada dUTP dan kepekaan kepada UNG, reagen harus dioptimumkan jika sensitiviti pengesanan berkurangan apabila menggunakan sistem UNG.Sila hubungi kami untuk mendapatkan sokongan teknikal jika perlu.
5. Untuk mengelakkan penguatan produk PCR bawaan antara tindak balas satu langkah, kawasan eksperimen khusus dan pipet diperlukan untuk penguatan.Kendalikan dengan sarung tangan dan tukar dengan kerap dan jangan buka tiub tindak balas selepas penguatan PCR.
