DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) ialah endodeoxyribonuclease yang boleh mencerna DNA untai tunggal atau dua.Ia mengiktiraf dan membelah ikatan fosfodiester untuk menghasilkan monodeoxynucleotides atau oligodeoxynucleotides beruntai tunggal atau dua dengan kumpulan fosfat di terminal 5' dan hidroksil pada terminal 3'.Aktiviti DNase I bergantung kepada Ca2+ dan boleh diaktifkan oleh ion logam divalen seperti Mn2+ dan Zn2+.5mM Ca2+ melindungi enzim daripada hidrolisis.Dengan kehadiran Mg2+, enzim boleh secara rawak mengecam dan membelah mana-mana tapak pada mana-mana helai DNA.Dengan adanya Mn2+, helai ganda DNA boleh dikenali dan dibelah secara serentak pada tapak yang hampir sama untuk membentuk serpihan DNA hujung rata atau serpihan DNA hujung melekit dengan 1-2 nukleotida menonjol.
Harta Produk
Bovine Pancreas DNase I telah dinyatakan dalam sistem ekspresi yis dan disucikan.
Clawan
| Komponen | Kelantangan | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, bebas RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
| Penampan 10×DNase I | 1mL | 1mL | 5× 1mL | 5× 10mL |
Pengangkutan dan Penyimpanan
1. Kestabilan Penyimpanan: – 15℃~-25℃ untuk penyimpanan;
2. Kestabilan Pengangkutan: Pengangkutan di bawah pek ais;
3. Dibekalkan dalam: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% gliserol, pH 7.6 pada 25℃ .
Definisi Unit
Satu unit ditakrifkan sebagai jumlah enzim yang akan merendahkan sepenuhnya 1 µg DNA pBR322 dalam 10 minit pada 37°C.
Kawalan kualiti
RNase:5U DNase I dengan 1.6 μg MS2 RNA selama 4 jam pada 37 ℃ tidak menghasilkan degradasi seperti yang ditentukan oleh elektroforesis gel agarose.
Bakteria Endotoksin:Ujian LAL, menurut Chinese Pharmacopoeia IV edisi 2020, kaedah ujian had gel, peraturan am (1143).Kandungan endotoksin bakteria hendaklah ≤10 EU/mg.
Arahan Penggunaan
1.Sediakan larutan tindak balas dalam tiub bebas RNase mengikut perkadaran yang disenaraikan di bawah:
| Komponen | Kelantangan |
| RNA | X μg |
| 10 × Penampan DNase I | 1 μL |
| DNase I, bebas RNase(5U/μL) | 1 U per μg RNA |
| ddH2O | Sehingga 10 μL |
2.37 ℃ selama 15 minit;
3.Tambah penimbal penamatan untuk menghentikan tindak balas, dan panaskan pada 65℃ selama 10 minit untuk menyahaktifkan DNase I. Sampel boleh digunakan terus untuk eksperimen transkripsi seterusnya.
Nota
1.Gunakan 1U DNase I setiap μg RNA, atau 1U DNase I untuk kurang daripada 1μg RNA.
2.EDTA perlu ditambah kepada kepekatan akhir 5 mM untuk melindungi RNA daripada terdegradasi semasa penyahaktifan enzim.
